紫外分光光度法的四種測定方法

測定時，除另有規定外，應以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照，采用1cm的石英吸收池，在規定的吸收峰波長±2nm以內測試幾個點的吸光度，或由儀器在規定波長附近自動掃描測定，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確，除另有規定外，吸收峰波長應在該品種項下規定的波長±2nm以內，并以吸光度最大的波長作為測定波長。一般供試品溶液的吸收度讀數，以在0.3～0.7之間為宜。儀器的狹縫波帶寬度宜小于供試品吸收帶的半寬度的十分之一，否則測得的吸光度會偏低；狹縫寬度的選擇，應以減小狹縫寬度時供試品的吸收度不再增大為準，由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品的吸光度后應減去空白讀數，或由儀器自動扣除空白讀數后再計算含量。

當溶液的pH值對測定結果有影響時，應將供試品溶液的pH值和對照品溶液的pH值調成一致。

含量測定一般有以下幾種方法：

（1）對照品比較法

按各品種項下的方法，分別配制供試品溶液和對照品溶液，對照品溶液中所含被測成分的量應為供試品溶液中被測成分規定量的100%±10%，所用溶劑也應*一致，在規定的波長測定供試品溶液和對照品溶液的吸光度后，按下式計算供試品中被測溶液的濃度∶

cx=（Ax/Ar）cr

式中 cx為供試品溶液的濃度；

Ax為供試品溶液的吸光度；

cr為對照品溶液的濃度；

Ar為對照品溶液的吸光度。

（2）吸收系數法

按各品種項下的方法配制供試品溶液，在規定的波長處測定其吸光度，再以該品種在規定條件下的吸收系數計算含量。用本法測定時，吸收系數通常應大于100，并注意儀器的校正和檢定。

（3）計算分光光度法

計算分光光度法有多種，使用時應按各品種項下規定的方法進行。當吸光度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測定時，波長的微小變化可能對測定結果造成顯著影響，故對照品和供試品的測試條件應盡可能一致。計算分光光度法一般不宜用作含量測定。

（4）比色法

供試品本身在紫外-可見光區沒有強吸收，或在紫外光區雖有吸收但為了避免干擾或提高靈敏度，可加入適當的顯色劑，使反應產物的最大吸收移至可見光區，這種測定方法稱為比色法。

用比色法測定時，應取數份梯度量的對照品溶液，用溶劑補充至同一體積，顯色后，以相應試劑為空白，在各品種規定的波長處測定各份溶液的吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線，再根據供試品的吸光度在標準曲線上查得其相應的濃度，并求出其含量。也可取對照品溶液與供試品溶液同時操作，顯色后，以相應的試劑為空白，在各品種規定的波長處測定對照品和供試品溶液的吸光度，按上述（1）法計算供試品溶液的濃度。

除另有規定外，比色法所用空白系指用同體積溶劑代替對照品或供試品溶液，然后依次加入等量的相應試劑，并用同樣方法處理制得。